
熒光計的檢測性能由光源系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測器件及信號處理算法共同決定。本文從技術底層出發(fā),深度解析優(yōu)云譜熒光計系列的核心技術鏈路,幫助用戶理解儀器如何實現(xiàn)微量、高靈敏度、高特異性的核酸與蛋白質(zhì)定量。
一、熒光檢測原理
熒光檢測的基本原理是熒光分子吸收特定波長的激發(fā)光,發(fā)射較長波長的發(fā)射光,通過測量發(fā)射光強度實現(xiàn)目標分子的定量。當熒光染料與dsDNA、RNA或蛋白質(zhì)結(jié)合后,其熒光量子產(chǎn)率顯著提升,儀器通過檢測熒光強度變化,換算為樣品濃度。
相比紫外分光光度計(如NanoDrop),熒光法的核心優(yōu)勢在于:特異性——只檢測與熒光染料結(jié)合的目標分子,不受基因組DNA、酚類、RNA等雜質(zhì)影響;靈敏度——可檢出低至pg級的核酸,遠優(yōu)于紫外260nm吸光法的檢測下限。
二、光源與波長配置
優(yōu)云譜熒光計全系采用高效單色LED作為光源,具有壽命長、穩(wěn)定性好、功耗低的優(yōu)勢。不同通道對應不同熒光染料:
熒光通道 | 激發(fā)波長 | 發(fā)射波長 | 適用檢測項目 |
藍光通道 | 460-480nm | 綠光 500-535nm | dsDNA HS/BR, ssDNA, RNA, microRNA |
紅光通道 | 630-650nm | 紅光 670-710nm | dsDNA HS(高靈敏度), 蛋白質(zhì) |
YP-QT1和YP-QT8-X2配備雙色通道(藍光+紅光),覆蓋齊全的檢測項目;YP-QT8和YP-QT8M為單藍光通道,適合dsDNA和蛋白質(zhì)檢測;YP-QT96M配備雙通道(457-483nm藍光+630-650nm紅光),頂部檢測設計適合96孔板整板讀取。
三、SiPMT檢測器件
SiPMT(Silicon Photomultiplier Tube,硅光電倍增管)是一種高靈敏度光子探測器,相比傳統(tǒng)光電二極管具有更高的增益與信噪比。優(yōu)云譜熒光計全系采用SiPMT作為檢測器件,在微弱熒光信號檢測中表現(xiàn)出色,實現(xiàn)dsDNA0.01ng/μL的檢出限。
四、檢測性能參數(shù)對比
型號 | 靈敏度(dsDNA) | 靈敏度(其他指標) | 動態(tài)范圍 | 檢測時間 |
YP-QT1 | 0.01ng/μL | ssDNA 0.01ng/μL; RNA 0.1ng/μL; microRNA 0.01ng/μL | 5個數(shù)量級 | ≤5s/樣品 |
YP-QT8 | 0.01ng/μL | ssDNA 0.01ng/μL; microRNA 0.01ng/μL | 5個數(shù)量級 | ≤5s/樣品 |
YP-QT8M | 0.01ng/μL | dsDNA BR 0.2-2000ng/μL | 5個數(shù)量級 | ≤5s/樣品 |
YP-QT8-X2 | 0.01ng/μL | RNA 0.25-100ng/μL; microRNA 0.1ng/μL | 5個數(shù)量級 | ≤5s/樣品 |
YP-QT96M | 0.05ng/μL | ssDNA 0.1ng/μL; RNA 0.5ng/μL; microRNA 0.1ng/μL | 5個數(shù)量級 | 整板45s |
五、2點校準與線性擬合
優(yōu)云譜熒光計采用2點校準曲線(空白對照+標準品),在全系機型中統(tǒng)一配置。通過線性擬合算法,將樣本熒光值代入校準曲線,直接換算為濃度數(shù)據(jù),5個數(shù)量級的動態(tài)范圍覆蓋從低濃度純化產(chǎn)物到中高濃度核酸樣本的檢測需求。

六、開放試劑平臺
熒光計的檢測性能不僅取決于硬件,更依賴于熒光檢測試劑的質(zhì)量與適配性。優(yōu)云譜熒光計為開放平臺,可靈活適配Qubit系列dsDNA、ssDNA、RNA、microRNA及蛋白質(zhì)定量試劑盒,也可使用其他兼容Qubit設備的品牌試劑。這一設計理念賦予實驗室在試劑選擇上的自主權,降低長期運營成本。
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